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《中(zhong)國藥典》2000版附(fu)錄無(wu)菌檢(jian)查法規定無(wu)菌檢(jian)查需(xu)氣(qi)菌、厭氣(qi)菌培(pei)養基(ji)管置30～50℃、真菌培(pei)養基(ji)管置20～25℃培(pei)養7日(ri)。

《中國藥典》2005版附(fu)錄無菌(jun)檢查法之后才開(kai)始延長至14天(tian)(tian)，因為(wei)大多數的(de)(de)細菌(jun)經過7天(tian)(tian)的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養都可以(yi)生長出來，這個(ge)(ge)對(dui)于本(ben)身允(yun)許少量(liang)菌(jun)落存(cun)在的(de)(de)非無菌(jun)藥物(wu)已經足夠了，但(dan)是對(dui)于要(yao)求(qiu)嚴格無菌(jun)的(de)(de)藥物(wu)，還要(yao)考(kao)慮到(dao)可能有極少數的(de)(de)細菌(jun)或者(zhe)真菌(jun)，以(yi)及(ji)霉(mei)菌(jun)孢子(zi)生長速(su)度比較慢，在7天(tian)(tian)時(shi)還未生長，所以(yi)要(yao)延長培(pei)(pei)(pei)養時(shi)間，以(yi)同樣條(tiao)件或者(zhe)變換為(wei)霉(mei)菌(jun)培(pei)(pei)(pei)養的(de)(de)溫(wen)濕(shi)度條(tiao)件，再培(pei)(pei)(pei)養7天(tian)(tian)，以(yi)便給可能存(cun)在的(de)(de)污染(ran)菌(jun)一個(ge)(ge)足夠的(de)(de)生長時(shi)間。

的確有(you)些菌(jun)(jun)(jun)(jun)在(zai)培(pei)養7天時觀察不(bu)到長菌(jun)(jun)(jun)(jun)現象(xiang)，但在(zai)14天培(pei)養后(hou)才發現了菌(jun)(jun)(jun)(jun)落，如(ru)結(jie)(jie)核桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)，與其它常見的細(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)比較(jiao)，結(jie)(jie)核桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的生長代謝(xie)緩(huan)慢(man)，并且在(zai)自然(ran)環境不(bu)利的情況(kuang)下，結(jie)(jie)核桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)具有(you)很強的生存能(neng)力：常見的細(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)一般10-30分種就能(neng)繁(fan)殖(zhi)一代，而(er)結(jie)(jie)核桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)則需(xu)要(yao)12-24小(xiao)時才能(neng)繁(fan)殖(zhi)—代，由此(ci)可(ke)見結(jie)(jie)核桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的生長代謝(xie)比潰兇(xiong)的細(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)緩(huan)慢(man)的多。

它屬于放線(xian)菌目(mu)分支(zhi)桿菌科分支(zhi)桿菌屬，為專性需氧菌，營養(yang)要(yao)求高，在含有蛋黃、馬鈴(ling)薯(shu)、甘油和天門冬素(su)等的固體培養(yang)基上才能生長。最(zui)適ph6.5～6.8，最(zui)適溫(wen)度為37℃，生長緩慢，接種后(hou)培養(yang)3～4周(zhou)才出現(xian)肉(rou)眼(yan)可(ke)見的菌落；抗結核治療后(hou)菌活力衰退，培養(yang)時需6--8周(zhou)甚(shen)至20周(zhou)后(hou)才出現(xian)菌落。

另外布魯(lu)氏菌為胞內寄生(sheng)菌，專性(xing)需氧，營養要求(qiu)高，多數菌株培(pei)養時需要多種氨基(ji)酸(suan)、硫(liu)胺素、煙酸(suan)和生(sheng)物素等，可在普通(tong)培(pei)養基(ji)中加入血清(qing)或肝滲液(ye)進(jin)行培(pei)養。

初(chu)次分離需5%-10%的CO2，生長(chang)緩(huan)慢，培養2-3天出現菌(jun)(jun)落(luo)，4-5天后菌(jun)(jun)落(luo)直(zhi)徑可達2-3mm，菌(jun)(jun)落(luo)無色、半(ban)透(tou)明、表面光滑(hua)、無溶(rong)血，革(ge)蘭染(ran)色為(wei)革(ge)蘭陰性球桿菌(jun)(jun)，革(ge)蘭染(ran)色時堿性復紅著色弱，可延長(chang)染(ran)色時間(jian)至3分鐘，鏡下(xia)菌(jun)(jun)體較小，呈細沙(sha)狀，偶見集聚成小團。觸酶(mei)陽性，氧(yang)化酶(mei)陽性，脲酶(mei)快速(su)陽性。

有文獻報道使用全自(zi)動血培(pei)養系統陽性率40-70%，平(ping)均培(pei)養時間5.7d（3-12d）[1]，并且(qie)生(sheng)長曲線平(ping)緩。布魯菌(jun)在(zai)(zai)自(zi)然環境(jing)中(zhong)(zhong)抵抗(kang)力(li)很強，在(zai)(zai)干(gan)燥土壤中(zhong)(zhong)可(ke)生(sheng)存數(shu)(shu)月，在(zai)(zai)皮毛中(zhong)(zhong)、乳及(ji)乳制品、凍(dong)肉中(zhong)(zhong)時間生(sheng)存較長，對常用的(de)物(wu)理消毒方法和化(hua)學(xue)消毒劑敏感，加(jia)熱(re)60℃或陽光(guang)下暴曬10～20min可(ke)殺死(si)該(gai)菌(jun)，5％的(de)石(shi)灰水、2％的(de)來蘇兒(er)、0.2％的(de)漂白粉均可(ke)以在(zai)(zai)數(shu)(shu)分鐘內(nei)將該(gai)菌(jun)殺死(si)。說明培(pei)養周期的(de)延長對于無菌(jun)藥物(wu)中(zhong)(zhong)的(de)菌(jun)檢還是很有必要的(de)。

培養及觀察：《中(zhong)國藥典》2015版(ban)四部通(tong)則1101無(wu)菌(jun)檢(jian)查法規(gui)定接(jie)種供試(shi)品后的培養基(ji)容器分(fen)別(bie)按(an)各培養基(ji)規(gui)定的溫度培養14天(tian)；接(jie)種生物制品供試(shi)品的硫(liu)乙醇酸鹽流(liu)體培養基(ji)的容器應(ying)分(fen)成兩等份，一(yi)份置(zhi)30?35℃培養，一(yi)份置(zhi)20?25℃培養。培養期間(jian)應(ying)逐日觀察并記(ji)錄是否(fou)有菌(jun)生長。

如在加入供試品(pin)后(hou)或(huo)在培(pei)(pei)養(yang)(yang)過程中(zhong)，培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)出現(xian)渾(hun)濁(zhuo)，培(pei)(pei)養(yang)(yang)14天后(hou)，不能(neng)從外(wai)觀上判斷有無微(wei)生物生長，可(ke)取該(gai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)液適(shi)量轉種(zhong)(zhong)至同種(zhong)(zhong)新鮮培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)中(zhong)，培(pei)(pei)養(yang)(yang)3天，觀察接(jie)種(zhong)(zhong)的同種(zhong)(zhong)新鮮培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)是(shi)否再(zai)出現(xian)渾(hun)濁(zhuo)。

《中(zhong)國藥典》2020版四部通則1101無菌檢查法規定(ding)接(jie)種(zhong)(zhong)供試(shi)品(pin)(pin)后的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)容器分別(bie)按各培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)規定(ding)的(de)(de)溫度培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)不少于14天(tian)；接(jie)種(zhong)(zhong)生(sheng)(sheng)物制品(pin)(pin)供試(shi)品(pin)(pin)的(de)(de)硫乙醇酸鹽流體培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)的(de)(de)容器應(ying)分成兩等份(fen)，一份(fen)置(zhi)30?35℃培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)，一份(fen)置(zhi)20?25℃培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)。培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)期(qi)間應(ying)定(ding)期(qi)觀察(cha)并記(ji)錄(lu)是否有菌生(sheng)(sheng)長(chang)。如在加入供試(shi)品(pin)(pin)后或(huo)在培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)過程中(zhong)，培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)出現渾濁，培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)14天(tian)后，不能從(cong)外觀上判斷有無微生(sheng)(sheng)物生(sheng)(sheng)長(chang)，可取該(gai)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液適量(liang)轉種(zhong)(zhong)至同種(zhong)(zhong)新(xin)鮮培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)中(zhong)，再培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)不少于4天(tian)，觀察(cha)接(jie)種(zhong)(zhong)的(de)(de)同種(zhong)(zhong)新(xin)鮮培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)是否再出現渾濁。

注：文章參考(kao)：[1]賈(jia)斌，張峰波，等(deng).血液檢出布魯氏菌陽性患者的實驗室及臨床特點(dian)分析[J].新(xin)疆醫科(ke)大學(xue)學(xue)報(bao)，2017，40（2）：136-140.；文章參考(kao)來源百度百科(ke)；《中國(guo)藥(yao)典》2015版(ban)附(fu)錄(lu)(lu)無菌檢查法；《中國(guo)藥(yao)典》2020版(ban)附(fu)錄(lu)(lu)無菌檢查法。

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