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倒(dao)平(ping)(ping)板(ban)是微生物實(shi)驗中的(de)基(ji)礎操作，看似簡單，但要做好(hao)（獲得均勻、平(ping)(ping)整、無(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)、厚度(du)(du)適宜、無(wu)(wu)(wu)氣(qi)泡的(de)平(ping)(ping)板(ban)）需要掌握關鍵(jian)細(xi)節(jie)。以(yi)下是詳細(xi)步驟和注意事項，助你做好(hao)倒(dao)平(ping)(ping)板(ban)：核心目標： 將熔(rong)化的(de)、溫度(du)(du)適宜的(de)、無(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)的(de)瓊(qiong)脂培(pei)養基(ji)，在(zai)無(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)條件下，均勻倒(dao)入無(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)的(de)培(pei)養皿(min)中，冷卻凝固后(hou)形成可用于接種微生物的(de)平(ping)(ping)板(ban)。

關鍵步驟與要點

1. 準備階段：

培養基滅菌與保溫：

準(zhun)確稱量配制培養基，充分(fen)溶解（避免結塊(kuai)）。

正確(que)滅菌（通常121℃, 15-20分鐘高(gao)壓(ya)蒸汽滅菌）。確(que)保滅菌徹底！

溫度控制(zhi)（至關重要！）： 滅菌(jun)后，將(jiang)熔化的培養(yang)基(ji)置于恒溫水浴鍋中(zhong)保(bao)溫。溫度通(tong)常控制(zhi)在45-50℃之間（手(shou)背觸碰容器壁感(gan)覺溫熱但不燙(tang)手(shou)）。

溫度過(guo)(guo)高（>55℃）： 倒(dao)板時產生(sheng)大量(liang)蒸汽，冷凝水過(guo)(guo)多；可能燙死部分已加入(ru)的(de)微生(sheng)物（如果倒(dao)含菌平板）；瓊脂凝固慢，不易鋪勻(yun)。

溫度過低（<45℃）： 培養基開始凝固，倒(dao)入皿中會結塊、不平整、厚度不均。

培養皿準備：

使(shi)用無菌、干燥、潔凈的(de)培養皿。新拆封或(huo)經干熱/濕熱滅菌的(de)均可(ke)。

將培養(yang)皿疊放在工作臺面上(shang)，方便快速拿取。

工作臺消毒：

徹底(di)清潔并用(yong)70-75%酒精(jing)擦拭(shi)超凈(jing)工作(zuo)臺或(huo)生物安(an)全柜臺面。開(kai)啟紫(zi)外(wai)燈(deng)照(zhao)射至少20-30分(fen)鐘（關閉后通(tong)風幾分(fen)鐘再開(kai)始操作(zuo)）。

操(cao)作前用酒精(jing)棉球擦拭雙手。

物品擺放：

將(jiang)保溫(wen)的培養基(ji)容器、疊放的培養皿(min)、酒精(jing)燈(deng)、打(da)火(huo)機、記號(hao)筆等有序放在超(chao)凈臺內易(yi)取(qu)用(yong)的位置。避免手(shou)臂頻繁跨越無菌物品上方。

2. 倒平板操作（無菌(jun)操作！）：

點燃(ran)酒(jiu)精燈(deng)： 在靠近工(gong)作區(qu)域中(zhong)心位置點燃(ran)酒(jiu)精燈(deng)，創造無菌區(qu)（火(huo)焰周圍(wei)氣流(liu)上升，減少塵埃下(xia)落）。

拿取培養皿：

用(yong)一只(zhi)手（通(tong)常是左手）平穩、快速地拿(na)起最上面(mian)一個培養皿的(de)底(di)部(bu)（不(bu)要碰內(nei)表面(mian)）。

在酒(jiu)精燈火焰附(fu)近，用另一(yi)只手（右手）輕輕掀開皿(min)蓋一(yi)條縫隙（約45度(du)角，不要(yao)完全打開！），大小剛(gang)好(hao)能倒(dao)入(ru)培(pei)養基。保(bao)持皿(min)蓋在皿(min)底上方，遮(zhe)擋灰塵(chen)和微生物。

傾倒培養基：

右手拿起(qi)裝(zhuang)有培養基的三角瓶(ping)或試管（再次(ci)在(zai)火(huo)焰上快速過一(yi)下瓶(ping)口/管口滅菌）。

在酒精燈火焰附近(jin)，將培養(yang)(yang)基(ji)瓶口/管口迅速通過(guo)火焰，然后(hou)立即從掀開的縫隙中將培養(yang)(yang)基(ji)平穩、勻速地倒入(ru)培養(yang)(yang)皿中。

倒入(ru)量： 通常90mm直徑培養皿(min)倒入(ru)約15-20ml培養基（約占皿(min)高度的1/3到1/2）。目標是凝固后厚(hou)度約3-4mm。太少(shao)易干裂，太厚(hou)可能影響菌落形態觀(guan)察和分離效果。

傾倒技巧： 不要直(zhi)接倒在皿底中(zhong)心，可以從邊緣開始緩(huan)慢旋轉倒入，或(huo)沿皿壁緩(huan)緩(huan)注入。避免產生氣泡。

覆蓋皿蓋與旋(xuan)轉搖晃：

倒(dao)入(ru)適量培養基后，迅速將掀開(kai)的皿(min)蓋蓋回原(yuan)位（整個過程盡量快，減少暴(bao)露時(shi)間）。

立即用(yong)雙(shuang)手（隔著皿(min)(min)蓋和皿(min)(min)底）拿起培養(yang)(yang)皿(min)(min)，在臺面上做水平(ping)“8&rdquo;字或(huo)(huo)同(tong)心(xin)圓旋轉搖晃(huang)，使熔化的培養(yang)(yang)基均勻(yun)鋪滿整個(ge)皿(min)(min)底。動作(zuo)要輕柔平(ping)穩，避免培養(yang)(yang)基濺到皿(min)(min)蓋或(huo)(huo)溢(yi)出。

靜置： 將平板(ban)水(shui)平放置在干(gan)凈(jing)、平整、無震動的臺面上，讓其自然冷(leng)卻凝固。不要堆(dui)疊！

3. 冷卻凝固：

讓平板在室(shi)溫下（或(huo)超凈臺內）完(wan)全凝固（通常需(xu)要20-30分鐘，視環境(jing)溫度而定）。觸摸(mo)皿(min)底感覺不(bu)溫即可。

減少冷凝水：

斜置(zhi)法(fa)（推薦(jian)）： 凝(ning)固約10-15分鐘（培(pei)養基已基本(ben)凝(ning)固但中心可(ke)能(neng)還(huan)有(you)點(dian)軟）后(hou)(hou)，將(jiang)平板(ban)倒置(zhi)（皿蓋(gai)在下，皿底(di)在上），然后(hou)(hou)疊放（不超(chao)過6個）。這樣冷凝(ning)水會(hui)(hui)聚集在皿蓋(gai)內，不會(hui)(hui)滴落到(dao)培(pei)養基表面破(po)壞菌落。

正置法(fa)： 如果(guo)平(ping)板(ban)需(xu)立即使(shi)用(yong)（如倒(dao)含菌平(ping)板(ban)），可正置凝固，但使(shi)用(yong)前需(xu)在培養箱中倒(dao)置一段時間讓冷凝水被皿蓋(gai)吸收或(huo)蒸發。冷凝水過多(duo)會影響菌落生長和分(fen)離。

4. 質量檢查與儲存：

外(wai)觀檢查： 凝固(gu)后檢查平板(ban)：

是否(fou)平整？ 表(biao)面光滑(hua)無波(bo)紋。

厚(hou)度是否(fou)均勻？ 邊緣和中心厚(hou)度一致。

有無氣泡(pao)？ 表(biao)面或內部應無氣泡(pao)。

有無污染？ 表面應潔凈無雜菌斑點（尤其邊緣）。

有(you)無(wu)裂紋？ 培(pei)養基(ji)應完(wan)整無(wu)裂痕。

無菌檢(jian)測： 隨(sui)機抽取部分平(ping)板（或(huo)每批次），在(zai)培養(yang)溫度下（如30℃或(huo)37℃）倒置培養(yang)24-48小時，檢(jian)查是否有雜菌生長(chang)。這是驗證無菌操作和培養(yang)基無菌性的關鍵步驟(zou)。

標記(ji)： 在(zai)平板底部邊緣（不要寫在(zai)皿蓋上(shang)！）清晰標記(ji)培養基名稱、日期、操作者等(deng)信息。

儲存： 合格的(de)平板可倒置于4°C冰箱保存（塑料袋包裹防干(gan)）。保存時間依(yi)培養基類型而定（通常1-4周），使(shi)用前檢查(cha)是否有(you)污染、干(gan)裂(lie)或變質(zhi)。

做好(hao)倒平板的“秘訣”（關(guan)鍵注(zhu)意事項總結）

無(wu)菌！無(wu)菌！無(wu)菌！ 這是核心。每一步都(dou)要有嚴格的無(wu)菌意識（環境(jing)、物品、操作）。

溫(wen)(wen)度(du)！溫(wen)(wen)度(du)！溫(wen)(wen)度(du)！ 培養基保溫(wen)(wen)在(zai)45-50℃是獲(huo)得平(ping)整平(ping)板的關鍵。

動(dong)作要(yao)(yao)快而穩(wen)： 掀蓋(gai)、倒液、蓋(gai)蓋(gai)、搖(yao)(yao)晃都要(yao)(yao)迅速，減少暴露時間。但傾倒和搖(yao)(yao)晃要(yao)(yao)平穩(wen)，避(bi)免產生(sheng)氣泡和飛濺。

培(pei)養皿(min)蓋(gai)不要(yao)完(wan)全打開！ 始終保持皿(min)蓋(gai)遮擋(dang)。

充分(fen)利用酒精燈火焰(yan)區(qu)域： 關鍵操作（開蓋、倒液(ye)）都在火焰(yan)附近的無菌區(qu)域進行。

旋(xuan)轉搖晃要均(jun)勻輕柔： 確保厚度(du)均(jun)勻，無氣(qi)泡。

冷卻(que)凝固要水平放置(zhi)： 避免平板傾斜導致厚度不均。

倒置儲存減(jian)少冷凝水： 這(zhe)對后續實驗（劃(hua)線、涂布(bu)、培養觀察）非常重要。

做(zuo)好標記和質量控制： 無(wu)菌檢(jian)測必不可少。

特殊情形：倒含(han)菌平板

如果需要將特定(ding)微生物直接混(hun)入(ru)培養基中倒(dao)板(ban)（如菌落計數、抗生素敏感(gan)試驗等），操(cao)作流程(cheng)基本一致，關鍵區別在(zai)于：

混(hun)菌(jun)步驟： 在保溫的(de)培養(yang)基冷卻到合適溫度（45-50℃）后，在無(wu)菌(jun)條件下，將(jiang)適量稀釋好的(de)菌(jun)液迅速、輕柔(rou)地(di)加入培養(yang)基中（通常加到三(san)角(jiao)瓶(ping)里），充分混(hun)勻（可溫和旋搖三(san)角(jiao)瓶(ping)，避免產生氣泡），然后立即倒入平板。

動作(zuo)更要迅速： 防止(zhi)菌液在溫熱培養基中停留時間過長影響活力。

避免高溫(wen)(wen)： 嚴格確保培養基溫(wen)(wen)度不高于(yu)50℃，否則會(hui)殺死(si)微(wei)生物。

倒板、搖晃、凝固(gu)步驟相同，但通常需要正置冷卻凝固(gu)，避(bi)免菌(jun)液隨冷凝水流淌。凝固(gu)后盡(jin)快(kuai)倒置培養。

總結

做好(hao)倒平(ping)板是微生物實驗成功的基礎(chu)。熟能生巧，多加(jia)練習，并時刻牢記無菌、溫度、速(su)度、均勻這四個要點，你一定能倒出漂亮、合格(ge)的平(ping)板！

本文由(you)廣州佳譽醫(yi)療(liao)器(qi)械(xie)有限公(gong)司(si)/佛山(shan)浩揚醫(yi)療(liao)器(qi)械(xie)有限公(gong)司(si)聯合(he)編輯 &nbsp;